禽流感现场快速检测技术的研究和应用
禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病,被国际兽疫局定为A类传染病,并被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。世界各地历次AI的暴发和流行,均导致大量禽只的死亡和生产性能急剧下降,造成了巨大损失,尤其是1997年香港H5N1禽流感病毒感染人事件的发生以来,更突出地显示了禽流感的公共卫生学意义。2005年5-7月,青海湖及周边区域发生斑头雁等候鸟大量死亡情况,经国家参考实验室检测为高致病性禽流感,这无疑为禽流感防控增加了难度。
禽流感引起家禽大批死亡
1997年香港发生了高致病性禽流感感染人事件
2005年高致病性禽流感引起青海湖大批野鸟死亡
禽流感长期发生,难以消灭,究其原因主要表现在:病毒具有高度的变异性,每一次暴发流行可能属于不同亚型病毒感染所致;而且禽流感传播迅速,一旦发生往往来不及确诊既已传播全群,发生大批死亡。如果能在疾病的早期进行确诊,对实行隔离、封锁、扑灭禽流感具有重要的意义。目前国内外用于禽流感检测诊断的主要方法有:病毒分离鉴定法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)等。这些诊断方法都属于常规的实验诊断方法,是世界上各个禽流感参考实验室使用的常规技术,但试验操作繁琐,往往需要各种专业的仪器设备和专门的技术人员,确诊费时费力。简便、快速、敏感、特异的禽流感诊断技术是该领域技术发展的方向。本研究进行禽流感的快速诊断技术研究,对该病的早期确诊、早期扑灭具有重要的指导意义。
根据禽流感病毒的理化特性,利用低致病性禽流感病毒为模型,建立了用于检测环境中禽流感病毒的方法:水样的超滤法和土壤样品的吸附-洗脱法。
根据免疫层析原理,利用单克隆技术,采用多膜复合的方法,建立了专门检测H5亚型禽流感病毒且适用于现场检测的免疫胶体金层析方法,该方法具有快速、简便、特异性好、灵敏度高等特点,无需特殊仪器设备,便于推广应用。
单克隆抗体技术确保该方法的高敏感性,该方法可以检测到0.125个血凝单位,灵敏性是琼脂糖扩散试验的128倍。该检测方法操作简便,不需专业人员操作即可。
1,撕开包装纸;2,用稀释液和检测样品混和,吸取上清加在加样孔;3,出现两个蓝色条带为阳性结果;4,出现一个蓝色条带为阴性结果。